腺相关病毒包装

腺相关病毒简介:

腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV) 是简单的非病原单链DNA ,需要辅助病毒(通常为腺病毒)参与复制。它编码两个末端的反向重复序列(ITR) 中的cap和rep基因。ITRs对于病毒的复制和包装具有决定性作用。cap基因编码病毒衣壳蛋白, rep基因参与病毒的复制和整合。AAV能感染多种细胞。rep基因产物存在时,病毒DNA很容易整合到人类第19号染色体。

重组腺相关病毒载体(rAAV) 源于非致病的野生型腺相关病毒,由于其安全性好、宿主细胞范围广(分裂和非分裂细胞)、免疫源性低,在体内表达外源基因时间长等特点,被视为最有前途的基因转移载体之一,在世界范围内的基因治疗和疫苗研究中得到广泛应用。经过10余年的研究,重组腺相关病毒的生物学特性己被深入了解,尤其是其在各种细胞、组织和体内实验中的应用效果方面已经积累了许多资料。在医学研究中,rAAV被用于多种疾病的基因治疗的研究(包括体内、体外实验);同时作为一种有特点的基因转移载体,还广泛用于基因功能研究、构建疾病模型、制备基因敲除鼠等方面。

赢润生物腺相关病毒包装系统:

赢润生物采用出自Stratagene 公司的商业化腺相关病毒包装系统进行重组腺相关病毒包装服务,并且以此为基础,开发、扩展了一系列的腺相关病毒表达载体,以适应客户的不同需求。

这套腺相关病毒表达载体,主要来自Strategene 公司,包括以下载体:

载体名称

出品公司

用途

启动子

荧光标记

真核筛选标记

pAAV-MCS

Stratagene

表达基因

CMV

pAAV-IRES-hrGFP

Stratagene

表达基因

CMV

hrGFP

pAAV-IRES-ZsGreen1

Yrbio

表达基因

CMV

ZsGreen1

pAAV-IRES-tdTomato

Yrbio

表达基因

CMV

tdTomato

pAAV-ZsGreenl-hU6

Yrbio

表达shRNA

hU6

ZsGreenl

pAA V-tdTomato-hU6

Yrbio

表达shRNA

hU6

tdTomato

您可以根据需要,选用合适的腺相关病毒表达载体,用来装载目的基因或者目的shRNA。

赢润生物可以为客户提供AAV1-AAV9等各种血清型的AAV包装服务,您可以根据后续实验需要,选择合适的血清型。

图3. 4 Optimal AAV serotypes for in vivo gene transfer to various tissues

腺相关病毒包装流程

表达基因用腺相关病毒包装流程:

步骤 描述 服务价格 服务周期
1 客户选择目的基因、表达载体,Yrbio负责实验设计 免费 1-2周
2 客户提供目的基因或从Yrbio基因库购买该基因 询价 1周
3 将目的基因CDS区构建至腺相关病毒表达载体上 询价 2-3周
4 AVV小量包装(一盘),摸索包装条件及确认病毒滴度 3000 2-3周
5 根据客户需要,大量包装目的腺相关病毒 2500/盘 2-3周

表达shRNA用腺相关病毒包装流程:

步骤 描述 服务价格 服务周期
1 客户选择靶基因或目的shRNA、表达载体,Yrbio负责实验设计 免费 1-2周
2 将目的shRNA构建至腺相关病毒载体上 询价 1周
3 有效shRNA筛选(筛靶套餐,保证至少一条shRNA有效,可选) 询价 2-3周
4 AVV小量包装(一盘),摸索包装条件及确认病毒滴度 3000 2-3周
5 根据客户需要,大量包装目的腺相关病毒 2500/盘 2-3周

注意事项

  1. AAV小量包装实验部分,包括AAV包装条件摸索、AAV滴度测定等内容。如果无法出毒,不收相关费用。
  2. 腺相关病毒大量包装费用按盘计算,每盘2500元。两盘起订,且须是偶数盘。
  3. 每盘腺相关病毒的滴度,根据插入基因或shRNA不同而各有差异。插入的外源片段较大,则腺相关病毒的滴度往往较低;插入的外源片段较小,则通常获得的腺相关病毒的滴度较高。一般滴度范围1011~1013V·g/mL,我们每盘提供200uL病毒,即每盘病毒总量在2×1010~2×1012V·g。
  4. 1012V·g/ml大致相当于107TU/ml。

腺相关病毒对照价格及周期

腺相关病毒对照 滴度 服务价格 服务周期
rAAV-ZsGreen1 (表达基因用对照)(绿色荧光) 1×1012V·g/mL,200uL 2500 1-2周
rAAV-tdTomato (表达基因用对照)(红色荧光) 1×1012V·g/mL,200uL 2500 1-2周
rAAV-ZsGreen1-shRNA-NC (表达shRNA用对照)(绿色荧光) 1×1012V·g/mL,200uL 2500 1-2周
rAAV-tdTomato-shRNA-NC (表达shRNA用对照)(绿色荧光) 1×1012V·g/mL,200uL 2500 1-2周

注:由于腺相关病毒对照产品销售或使用频繁,不一定有现货,订购前请先咨询:yrbio@cf-zuche.com

客户须知

  1. 上述价格均不包括远输费用。如果您需要干冰运输,按照50元/公斤干冰计算,一般需要加10公斤干冰, 即干冰运输费用在500元左右。如果您同意采用超低温冰袋运输,则运输费用为50元。我们将采用快递寄送,全国大部分城市到货周期为2~4天;
  2. 本公司原则上只提供包装好的腺相关病毒产品。如果客户需要我们提供上游构建的表达载体,则需要额外支付相应的表达载体购买费用(部分载体免费,部分载体需收费,具体请联系客服);
  3. 如客户所需包装的目的基因由客户提供, 则客户应提供所要构建腺相关病毒的目的基因的序列及其它相关说明信息(例如装载载体、质粒图谱、酶切位点等)。客户应对所提供的材料及信息、负责,如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担;
  4. 如shRNA序列由客户提供,则本公司只负责证明包含有该shRNA序列的腺相关病毒构建成功,而不对其干扰效率做任何保证。